细胞的原代培养实验

标签： 细胞 原代 传代培养

本实验目的是了解原代培养的原理，初步掌握哺乳动物细胞的原代培养的基本操作过程，为生物工程在医学上的应用打下基础同时也能掌握无菌操作技术。

实验方法原理

细胞培养(Cell culture)是模拟机体内生理条件，将细胞从机体中取出，在人工条件下使其生存、生长、繁殖和传代，进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等问题的研究。近年来，广泛地应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，发展成一种重要生物技术，并取得显著成就。由体内直接取出组织或细胞进行培养叫原代培养。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，适用于研究。一般说来，幼稚状态的组织和细胞，如：动物的胚胎、幼仔的脏器等更容易进行原代培养。

实验材料

胎大鼠

试剂、试剂盒

1640培养液　PBS 胰蛋白酶　EDTA混合消化液 乙醇

仪器、耗材

手术器械　细胞培养皿　细胞培养瓶　吸管　离心管　煤气灯　烧杯　超净工作台　二氧化碳培养箱　倒置显微镜

实验步骤

吸取0.25％胰蛋白酶一0.02％EDTA 混合消化液1 ml，加入离心管中， 与组织块混匀后，加上管口塞子，37 ℃水浴中消化8～10 分钟，每隔几 分钟摇动一下试管，使组织与消化液充分接触，静止，吸去上清，向离心管中加入5～10 ml 含10％小牛血清的1640 培养基，用吸管吹打混匀， 移入二个细胞培养瓶中，置于二氧化碳培养箱中培养。

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